原子力顯微鏡的制樣流程相對(duì)復(fù)雜,這主要是因?yàn)?/span>AFM原子力顯微鏡對(duì)樣品的平整度和固定性有較高要求,同時(shí)不同類型的樣品(如蛋白質(zhì)、DNA、活細(xì)胞等)需要采用不同的制樣方法。以下是原子力顯微鏡制樣流程的一般步驟和注意事項(xiàng),以供參考:
一、制樣原則
干凈:樣品表面B須干凈,無污染物。污染物不僅會(huì)污染探針,還會(huì)干擾成像結(jié)果。
固定:樣品需要牢固地固定在基底上,以防止在掃描過程中移動(dòng)或變形。
二、基底準(zhǔn)備
云母片:常用于生物樣品的制樣。S次使用時(shí),將云母片固定在適當(dāng)大小的玻璃片上。每次使用前,用雙面膠或透明膠帶撕掉*上層的云母片,確保使用新鮮、平整的云母表面。
硅片:使用前需用酸、堿、超純水依次超聲清洗,以確保潔凈。
三、樣品處理與固定
粉末樣品(如納米顆粒):先用分散劑超聲分散,然后取一滴分散液滴在云母片或硅片上,干燥后進(jìn)行測(cè)試。具體步驟包括將粉末加入溶劑中(如超純水或乙醇),濃度控制在一定范圍內(nèi)(如40mg/ml以下),超聲分散后滴加到基底上,用氮?dú)獯祾吒稍铩?/span>
蛋白質(zhì)樣品:蛋白質(zhì)是兩性分子,可以通過調(diào)節(jié)pH值至等電點(diǎn)附近使蛋白質(zhì)呈電中性,或降低pH值使蛋白質(zhì)帶正電,從而吸附在帶負(fù)電的云母表面。制樣時(shí)需注意溶液的pH值和離子強(qiáng)度。
DNA樣品:由于DNA帶負(fù)電荷,而云母表面也帶負(fù)電,因此需要通過加入正離子或使用硅烷化試劑修飾云母表面使其帶正電來吸附DNA。
活細(xì)胞樣品:活細(xì)胞制樣需預(yù)先判斷樣品是否適合AFM。理想的細(xì)胞樣品應(yīng)覆蓋率為50%~70%,貼壁生長且吸附牢固。如果細(xì)胞覆蓋率低、形狀不貼壁或已死亡,則不適合進(jìn)行AFM原子力顯微鏡測(cè)試。可以通過聚賴氨酸、膠原蛋白、纖粘蛋白或?qū)羽みB蛋白修飾基底來提高細(xì)胞粘附力。
四、其他注意事項(xiàng)
樣品量:固體樣品送樣量應(yīng)不少于一定量(如10mg),液體樣品應(yīng)不少于一定體積(如3mL),以確保測(cè)試的準(zhǔn)確性。
分散劑類型:對(duì)于粉末樣品,需要告知分散劑的類型(如水、IPA、DMF等),以便測(cè)試人員選擇合適的溶劑進(jìn)行分散。
測(cè)試需求:在送樣時(shí),需要告知測(cè)試人員掃描范圍大小(如*大為80微米)和圖片張數(shù)等測(cè)試需求。
綜上所述,原子力顯微鏡的制樣流程相對(duì)復(fù)雜,需要根據(jù)不同類型的樣品采用不同的制樣方法和注意事項(xiàng)。然而,通過遵循一定的制樣原則和步驟,可以制備出符合AFM原子力顯微鏡測(cè)試要求的樣品,從而獲得準(zhǔn)確的測(cè)試結(jié)果。