AFM原子力顯微鏡不同生物樣品制樣方法的介紹

 新聞資訊     |      2023-08-31 09:21:42

原子力顯微鏡不同生物樣品制樣方法:

蛋白質(zhì)、DNA和活細(xì)胞是比較有代表性的生物樣品,想要把這些樣品牢固地固定在基底表面上,需要一定的技巧。測(cè)生物樣品一般選用云母作為基底云母本身是層狀結(jié)構(gòu),每揭一層都是原子級(jí)平整的新鮮表面。所以處理起來比較簡(jiǎn)單。云母表面帶負(fù)電荷,可以拿云母直接吸附帶正電荷的樣品,蛋白質(zhì)、DNA往往利用靜電相互作用來進(jìn)行固定。

原子力顯微鏡.jpg

1、蛋白質(zhì)制樣:蛋白質(zhì)是一個(gè)兩性分子,調(diào)節(jié)pH值在等電點(diǎn)附近,蛋白質(zhì)正負(fù)電荷相等,分子呈電中性,降低pH時(shí)蛋白質(zhì)呈正電。因此對(duì)于蛋白質(zhì)來說可以調(diào)節(jié)溶液pH值低于等電點(diǎn),使樣品直接吸附在云母表面去做成像和力學(xué)研究。

2 DNA制樣DNA成像和蛋白質(zhì)類似,DNA帶負(fù)電荷,云母表面也帶負(fù)電。一種方法可以在溶液中加入正離子,正離子會(huì)先吸附在表面上,DNA再吸附在正離子上;另一種方法是用硅烷化試劑把云母表面修飾成氨基結(jié)尾,這樣云母表面帶正電就可以吸附DNA分子。

3、活細(xì)胞制樣:活細(xì)胞比較大,從光學(xué)顯微鏡下就可以預(yù)先判斷樣品是否適合做AFM原子力顯微鏡。細(xì)胞制樣一般推薦覆蓋率50%~70%,貼壁生長(zhǎng),吸得比較牢固,這是非常理想的。如果覆蓋率低,細(xì)胞是圓的沒有貼壁,或者是死的一碰就移動(dòng)。有的可能覆蓋率尚可但表面的細(xì)胞可能是死的 已經(jīng)脫離表面。還有的是太密了,有可能是好幾層,*下層是貼壁了,但上層的貼不牢,這些都不是理想的樣品。

細(xì)胞制樣

如果細(xì)胞不容易貼壁 我們可以借助其他物質(zhì)來幫助細(xì)胞吸附在表面上如用聚賴氨酸,膠原蛋白,纖粘蛋白,層黏連蛋白修飾基底,從而提高細(xì)胞與其底的粘附力。