原子力顯微鏡作為一種重要的單分子研究工具，在教學(xué)、科研領(lǐng)域的研究中得到了廣泛應(yīng)用。目前主要以測量普通樣品的形貌為主，因?yàn)樯飿悠肥帧皨少F”，制樣方法比較繁瑣。

今天，小編跟大家分享幾種常見生物樣品測試AFM原子力顯微鏡的制樣方法。

原子力顯微鏡制樣原則

AFM原子力顯微鏡的制樣原則是要把待測樣品固定在干凈的其底上，如果樣品表面很臟污染物不僅會(huì)污染探針，同時(shí)還會(huì)干擾成像結(jié)果。如果下針后樣品是移動(dòng)的也是沒辦法完成成像的，所以無論是空氣中還是液下成像,制樣需要滿足上述兩個(gè)條件即干凈+固定。

液下成像，Z簡單的方法是直接在樣品表面滴一滴液體，如晶體表面或者比較小的樣品。另一種方法是需要將樣品整個(gè)浸泡在液體中，如細(xì)胞測樣時(shí),B須將細(xì)胞種在培養(yǎng)皿中。浸泡的時(shí)候需注意,液體高度不能高于保護(hù)套高度，這是很重要的一點(diǎn)。如果要把樣品粘在大的基底上，需要注意所用的膠不能是水溶性的。

不同生物樣品制樣方法

蛋白質(zhì)、DNA和活細(xì)胞是比較有代表性的生物樣品，想要把這些樣品牢固地固定在基底表面上，需要一定的技巧。測生物樣品一般選用云母作為基底云母本身是層狀結(jié)構(gòu)，每揭一層都是原子級(jí)平整的新鮮表面。所以處理起來比較簡單。云母表面帶負(fù)電荷，可以拿云母直接吸附帶正電荷的樣品，蛋白質(zhì)、DNA往往利用靜電相互作用來進(jìn)行固定。

1.蛋白質(zhì)制樣：蛋白質(zhì)是一個(gè)兩性分子，調(diào)節(jié)pH值在等電點(diǎn)附近,蛋白質(zhì)正負(fù)電荷相等，分子呈電中性，降低pH時(shí)蛋白質(zhì)呈正電。因此對(duì)于蛋白質(zhì)來說可以調(diào)節(jié)溶液pH值低于等電點(diǎn),使樣品直接吸附在云母表面去做成像和力學(xué)研究。

2. DNA制樣：DNA成像和蛋白質(zhì)類似，DNA帶負(fù)電荷，云母表面也帶負(fù)電。D一種方法可以在溶液中加入正離子，正離子會(huì)先吸附在表面上，DNA再吸附在正離子上；另一種方法是用硅烷化試劑把云母表面修飾成氨基結(jié)尾，這樣云母表面帶正電就可以吸附DNA分子。

3. 活細(xì)胞制樣：活細(xì)胞比較大，從光學(xué)顯微鏡下就可以預(yù)先判斷樣品是否適合做。細(xì)胞制樣一般推薦覆蓋率50%~70%,貼壁生長,吸得比較牢固,這是非常理想的。如果覆蓋率低，細(xì)胞是圓的沒有貼壁，或者是死的一碰就移動(dòng)。有的可能覆蓋率尚可但表面的細(xì)胞可能是死的 已經(jīng)脫離表面。還有的是太密了，有可能是好幾層,Z下層是貼壁了,但上層的貼不牢，這些都不是理想的樣品。

細(xì)胞制樣

如果細(xì)胞不容易貼壁 我們可以借助其他物質(zhì)來幫助細(xì)胞吸附在表面上如用聚賴氨酸，膠原蛋白，纖粘蛋白，層黏連蛋白修飾基底，從而提高細(xì)胞與其底的粘附力。